激素检测的原理是什么问
激素检测的原理是什么
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激素检测有放射免疫、化学发光、酶联免疫吸附等分析法均基于抗原-抗体特异性结合利用标记物信号定量不同激素含量,不同激素因分子结构等差异检测方法有别,孕妇检测需结合孕周,儿童检测要考虑年龄发育阶段且结果解读关联其内分泌轴功能与正常范围差异。
一、常见激素检测原理分类及解析
(一)放射免疫分析法原理
利用放射性标记的激素与样本中未标记的激素竞争性结合特异性抗体。具体过程为:将特异性抗体与放射性标记的激素混合,形成标记激素-抗体复合物,然后加入样本,样本中的未标记激素会与标记激素竞争结合抗体,反应达到平衡后,分离结合相和游离相,测定结合相的放射性强度,通过标准曲线计算出样本中未标记激素的含量。例如,检测甲状腺激素中的甲状腺素(T4)时,用放射性碘标记的T4与抗T4抗体结合,样本中的T4会竞争结合抗体,根据放射性强度即可算出样本中T4的浓度。
(二)化学发光免疫分析法原理
通过化学发光物质标记抗体或抗原,当标记物与样本中的待测激素结合后,发生化学反应产生光子,利用发光检测仪检测光子的强度来定量激素水平。以检测促甲状腺激素(TSH)为例,将包被有抗TSH抗体的微粒与样本、标记了化学发光物质的抗TSH抗体混合,形成抗体-微粒-待测TSH-标记抗体复合物,经过洗涤分离后,加入发光底物,复合物中的化学发光物质发生反应产生光子,根据光子强度与标准品比较,得出样本中TSH的浓度。
(三)酶联免疫吸附分析法原理
以酶标记的抗体或抗原进行免疫反应,抗原抗体结合后,加入酶的底物,酶催化底物发生显色反应,通过显色的深浅来定量激素含量。例如检测人绒毛膜促性腺激素(hCG),将抗hCG抗体包被在固相载体上,加入样本和酶标记的抗hCG抗体,若样本中有hCG,就会形成固相载体抗体-hCG-酶标记抗体复合物,洗涤后加底物,酶分解底物显色,颜色深浅与hCG浓度成正比。
二、不同激素检测原理的共性与差异
(一)共性
都是基于抗原-抗体特异性结合反应,利用标记物的信号(放射性、化学发光、酶促显色等)来间接反映待测激素的含量,通过与标准品比较建立定量关系。
(二)差异
不同激素因分子结构、体内代谢特点等不同,所采用的具体检测方法会有差异。比如性激素中的雌激素和雄激素,由于其化学结构特点,可能在标记方式、抗体特异性选择等方面有不同设计;而垂体分泌的促激素与靶腺激素的检测原理虽都基于内分泌轴调节,但因促激素作用靶腺不同,检测时的抗体针对的抗原表位等会有区别。
三、特殊人群激素检测原理应用的考虑
(一)孕妇
孕期女性体内激素水平会发生生理性变化,如人绒毛膜促性腺激素在孕期显著升高,检测时要考虑孕周对应的正常激素水平范围。例如,在早孕期检测hCG,其水平随孕周增长而呈现特定的变化趋势,检测原理依然基于抗原-抗体反应,但解读结果需结合孕周来判断是否正常,避免因孕期激素生理性波动造成误判。
(二)儿童
儿童处于生长发育阶段,不同年龄阶段激素水平有其正常范围。以生长激素检测为例,儿童在睡眠、运动等状态下生长激素分泌有波动,检测时依据儿童的年龄阶段来选择合适的检测时机(如进行生长激素激发试验),其检测原理同样基于抗原-抗体等特异性结合反应,但结果解读要紧密结合儿童的年龄、发育阶段等因素,因为儿童的内分泌轴功能与成人不同,激素水平正常范围差异较大。
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