新冠感染核酸检测步骤有什么问

新冠感染核酸检测主要通过鼻咽/口咽拭子采样、样本保存、病毒核酸提取、实时荧光RT-PCR扩增及结果判读五个步骤完成，核心是通过检测病毒特异性核酸片段实现早期诊断。

一、采样操作

优先采用鼻咽拭子（成人/有鼻腔条件者）或口咽拭子（成人/儿童/鼻腔手术史者）：采样时拭子轻柔深入鼻腔2-3cm（成人）或口腔悬雍垂后下方（儿童），旋转擦拭10-15秒，避免触碰舌面/扁桃体；采样前嘱咐受检者避免吞咽、咳嗽，减少样本污染。特殊人群如婴幼儿需家长固定头部，老年/咽喉敏感者建议缩短采样时间。

二、样本保存

采样后立即将拭子头部浸入病毒保存液（含胍盐/Tris缓冲液），挤压去除多余液体，旋紧管盖密封；样本需4℃冷藏≤4小时或常温（25℃以下）≤2小时，超期需重新采样。运输时用生物安全二级包装，冷藏条件下24小时内送达实验室。

三、核酸提取

实验室采用磁珠法/柱提法：通过裂解液破坏病毒包膜，蛋白酶K消化蛋白，磁珠吸附核酸或柱膜结合核酸，70%乙醇洗涤去除杂质，最终获得纯度≥95%的RNA/DNA模板，确保后续扩增特异性。

四、PCR扩增与检测

使用实时荧光RT-PCR仪，针对新冠病毒ORF1ab、N、S基因设计引物探针，经逆转录合成cDNA后，经95℃变性、55℃退火、72℃延伸循环（40轮）；通过荧光信号强度判断结果：Ct值≤35判定阳性，Ct值≥40判定阴性，35-40需结合临床复检排除假阳性。

五、特殊人群注意

孕妇采样前告知医护人员，避免鼻腔过度刺激；老年/认知障碍者需家属陪同，采样前确认无吞咽困难；儿童用玩具分散注意力，采样动作轻柔；采样全程需穿防护服、戴N95口罩，生物安全等级达二级，避免样本交叉污染。