癌胚抗原的测定方法是什么问
癌胚抗原的测定方法是什么
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酶联免疫吸附测定法利用抗原抗体特异性结合反应,样本中癌胚抗原与包被抗原竞争结合抗体,加酶标抗体后经底物显色用酶标仪测吸光度算浓度;化学发光免疫分析法用化学发光物质标记抗体,样本中癌胚抗原与标记抗体结合形成免疫复合物,检测发光强度算含量,具灵敏度高、特异性强、检测快、可自动化等优势;检测前患者一般需空腹采血,特殊人群如孕妇、老年患者有相关注意事项,样本要及时分离保存防溶血污染等影响结果。
一、酶联免疫吸附测定法(ELISA)
1.原理:利用抗原抗体特异性结合反应,将癌胚抗原相关抗原包被在固相载体上,加入样本后,样本中的癌胚抗原与包被抗原竞争结合抗体,再加入酶标抗体,通过酶催化底物显色,显色强度与样本中癌胚抗原浓度呈反比。
2.操作步骤:需先进行样本采集(如血清样本),然后将样本加入预包被癌胚抗原抗体的微孔板中,孵育使抗原抗体反应,洗涤去除未结合物质,加入酶标二抗,再次孵育后洗涤,加入底物显色,最后用酶标仪测定吸光度值,根据标准曲线计算癌胚抗原浓度。
二、化学发光免疫分析法
1.原理:采用化学发光物质标记抗体,样本中的癌胚抗原与标记抗体结合形成免疫复合物,通过仪器检测免疫复合物产生的化学发光强度,发光强度与样本中癌胚抗原浓度成正比。
2.优势:该方法灵敏度高、特异性强,检测速度较快,能实现自动化检测。操作时同样需采集样本(如血清、血浆等),样本与标记抗体反应后,通过仪器检测发光信号,进而计算癌胚抗原含量。
三、检测前注意事项
1.患者准备:一般要求患者空腹采集血液样本,避免饮食等因素对检测结果产生干扰。对于特殊人群如孕妇,妊娠期间癌胚抗原可能出现生理性轻度升高,检测时需结合临床孕周等情况综合分析;老年患者检测时需关注其基础疾病对样本采集及结果判读的影响,如肝肾功能不全可能影响物质代谢,间接影响癌胚抗原检测结果。
2.样本采集与保存:采集静脉血后,需及时分离血清或血浆,避免样本溶血、污染等情况,若不能及时检测,应妥善保存样本,严格按照实验室要求的保存条件(如冷藏或冷冻)保存,防止样本变质影响检测结果准确性。
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