真菌免疫组化问

真菌免疫组化基于抗原抗体免疫反应，利用标记抗体显色来确定组织细胞内真菌抗原，常用针对曲霉菌和念珠菌的抗体，操作包括规范采集处理标本、抗原修复、免疫染色及结果观察判读，临床用于侵袭性真菌感染诊断与病情监测，注意标本质量控制、染色过程规范及结果需结合临床等综合判读。

一、定义与原理

真菌免疫组化是利用抗原与抗体特异性结合的特性，通过化学反应使标记抗体的显色剂显色，以确定组织细胞内真菌抗原的技术。其原理基于抗原抗体免疫反应，将已知抗体标记后与组织或细胞中的真菌抗原结合，形成抗原抗体复合物，再通过检测标记物来显示真菌的存在部位、形态等。

二、常用抗体及特异性

1.针对曲霉菌的抗体：如半乳甘露聚糖抗体，对曲霉菌感染具有一定特异性，可用于侵袭性曲霉菌感染的辅助诊断。

2.针对念珠菌的抗体：有针对念珠菌的特异性抗体，能识别念珠菌相关抗原，助力念珠菌感染的检测。

三、操作步骤

1.标本采集：根据临床情况采集合适标本，如组织、体液等，采集时需规范操作以避免污染，儿童标本采集要考虑其配合度及安全，防止损伤等。

2.标本处理：对采集的标本进行固定、切片等处理，固定要保证抗原不失活，切片厚度等要符合检测要求。

3.抗原修复：通过特定方法修复组织切片中的抗原，使其能与抗体更好结合。

4.免疫染色：依次进行一抗孵育、二抗孵育、显色等步骤，严格控制各步骤的温度、时间等条件，保证免疫染色的特异性。

5.结果观察与判读：在显微镜下观察染色结果，结合临床症状及其他检查综合判读，不同年龄人群在结果判读时需考虑其生理特点对结果的可能影响，儿童因免疫系统等发育尚未完善，结果判读要更谨慎。

四、临床应用

1.侵袭性真菌感染诊断：可用于肺部、深部组织等部位侵袭性真菌感染的早期辅助诊断，帮助医生明确感染病原体种类，如侵袭性曲霉菌感染、念珠菌感染等的辅助诊断，为临床抗真菌药物选择提供依据。

2.病情监测：通过动态检测真菌免疫组化结果，可辅助评估患者抗真菌治疗效果及病情变化，不同年龄患者病情发展及对治疗的反应不同，监测时需综合考虑。

五、注意事项

1.标本质量控制：标本采集要规范，避免污染，不同年龄患者标本采集要求不同，儿童标本采集需轻柔操作，防止标本质量不佳影响检测结果。

2.染色过程规范：免疫染色各步骤需严格把控温度、时间等，保证染色特异性，防止因操作不当导致假阳性或假阴性结果。

3.结果综合判读：结果判读需结合临床症状、影像学等其他检查，不能仅凭真菌免疫组化结果单独诊断，不同病史患者临床情况不同，综合判读时要全面考虑其病史等因素对结果的影响，如患者有基础免疫缺陷病史等，对结果判读的影响需充分评估。