免疫组化抗体稀释的操作步骤是什么问

准备阶段需选取洁净无菌器材并依样本数备抗体稀释液，查阅抗体说明书确认基础信息，吸取抗体要精准，稀释时将原液缓加入稀释液轻柔混匀，若需梯度稀释逐步进行，特殊人群参与实验要严控操作环境洁净度与器材灭菌，调整操作适配样本特性保障安全准确。

一、准备阶段

1.器材准备：选取洁净无菌的离心管、移液器及配套吸头，保证无污染物残留。依据实验样本数量准备适量符合要求的抗体稀释液，常见稀释液为含防腐剂的磷酸盐缓冲液（PBS）等。

2.信息确认：查阅待稀释抗体的说明书，明确其推荐的稀释比例、适用样本类型等基础信息，因不同抗体因抗原表位结构等差异，初始稀释要求有所不同。

二、抗体吸取

使用移液器精准吸取所需量的抗体原液，吸取过程中避免产生气泡，保证吸取体积精确，可根据抗体瓶标注浓度与所需稀释后浓度计算吸取体积。

三、稀释操作

1.混合原液与稀释液：将吸取的抗体原液缓慢加入稀释液中，用移液器轻柔吹打混匀，避免剧烈振荡致使抗体失活，确保抗体均匀分散在稀释液里。

2.梯度稀释操作：若需梯度稀释，按设定稀释倍数逐步进行，每步稀释均需再次混匀，例如要1：10稀释时，取一定量已稀释抗体溶液再加入相应量稀释液后充分混匀。

四、特殊人群注意事项

儿童等特殊人群参与免疫组化实验使用稀释抗体时，需严格把控操作环境洁净度，所有器材需更严格灭菌处理，操作中避免交叉污染。因儿童生理特点与成人不同，免疫系统等尚未完全发育成熟，对操作细微变化更敏感，故要遵循儿科安全护理原则，调整操作适配儿童样本特性，确保实验结果准确且保障儿童安全，减少不必要刺激与风险。