理化鉴别中常用的分析方法有化学分析法和薄层色谱法。
对比了蛇胆汁和鸡胆汁中的氨基酸及微量元素，发现蛇胆汁与鸡胆汁均含有18种氨基酸，鸡胆汁中除了牛磺酸含量略低于蛇胆汁外，其他氨基酸的种类和含量非常相似;蛇胆汁中微量元素Ca、Mg、Fe、Zn、Cu的含量均略高于鸡胆汁。
通过胆囊外观性状，胆汁的K2Cr2O7沉淀、糠醛-硫酸显色反应以及薄层色谱法(TLC)，鉴别了眼镜蛇胆检品，认为该方法简单、专属性强，可作为真伪蛇胆的鉴别方法。
用糠醛-硫酸法鉴别了蛇胆及其伪品鸡胆、鸭胆、鱼胆等，认为该法结果可靠，简便易行，但不能鉴别蛇类种属。薄层层析法由于具备色谱分离特性，因此更适合分析复杂样品。
以牛磺胆酸为对照用薄层层析法分析了眼镜蛇蛇胆样品并见到8个显色斑点。
此外，TLC法还被广泛用于蛇胆复方制剂的鉴别研究。
综上所述，牛磺胆酸等成分为对照用TLC法可有效鉴别出复方制剂中的蛇胆，但不能区别蛇胆的种属来源。
1.4分子生物学鉴定
由于蛇胆保存和制剂加工过程中的处理方法往往破坏了蛇胆的完整性，因此依据性状、显微特征及理化性质进行鉴别有一定困难，分子生物学方法能克服上述问题，呈现更客观的结果。众所周知，物种的多样性是基因多态性的结果，而基因多态性可在分子水平上检测，它比在形态、组织和化学水平上检测更能代表其变异类型的遗传标记。
将分子标记技术运用到蛇类药材的鉴定研究中，对游蛇科10种蛇基因组DNA的多态性进行了分子遗传标记的研究;通过提取金钱白花蛇及其伪品药材和原动物样品的模板DNA，分析其Cytb基因片断鉴别了金钱白花蛇。
分子生物学鉴别方法虽能有效鉴别出蛇类药材的种属来源，目前在蛇类药材的鉴别中应用较广，但由于市售蛇胆样品的复杂性，蛇胆DNA的含量较低，故此法在蛇胆鉴别中的应用较少，具体应用方案还有待于进一步完善。
蛇胆及其制剂的含量测定
目前蛇胆药材及其制剂中蛇胆的含量测定多以总胆酸或牛磺胆酸盐为指标，测定方法主要是紫外分光光度法、薄层扫描法(TLCS)和高效液相色谱法(HPLC)。
