在内分泌六项检查中，检查的项目不同，注重方法也不同。
检查的内容可以全查，也可以单项检查，但目前许多的医院是全项检查。检查睾酮，是抽取静脉血清2毫升，常用的方法是放射免疫法，分离血清后即可测定;检查雌激素(雌二醇)、孕激素、卵泡刺激素，也是静脉血清分离后检查，分别需要2毫升;检查黄体生成素，虽然同样是放射免疫法检查，但由于黄体生成素是脉冲式分泌，标本采集好在1小时内采集3-4次，然后混合一起进行测定，这样更加准确;泌乳素应该空腹检查，在早上9点钟左右抽取血清。
为了检查准确，在检查之前不可服用性激素类的药物，假如服用，应该在激素彻底排泄之后检查，以免发生误诊。